اندازگیری غلظت T4 در سرم به عنوان یک روش ارزشمند آزمایشگاهی در تشخیص اختلالات تیروئید ارائه شده است. اهمیت این فاکتور باعث پیشرفت قابل توجهی در متدولوژی سنجش این هورمون در سه دهه اخیر شده است. این تکامل روش می تواند نتیجه ای از تجربه تست PBI (پروتئین باند شده به ید) که به روش ایمونواسی پیشرفته ای تبدیل شده است، باشد.

روش به کار رفته در این کیت الایزا به تکنسین اجازه می دهد که با یک حساسیت خوب و چندین روش تکنیکی ساده بتواند به طور مستقیم غلظت کل T4 را بسنجد. در این روش سرم مرجع، نمونه های بیمار و یا کنترل ها در ابتدا  به چاهک ها اضافه می شود و سپس کونژوگه آنزیم-T4 اضافه می شود و با هم مخلوط می شوند. یک واکنش رقابتی بین آنزیم کونژوگه شده و تیروکسین برای اتصال به جایگاه های محدود آنتی بادی های تثبیت شده در ته چاهک به وجود می آید. بعد از اتمام فرآیند انکوباسیون آنتی بادی های باند شده با کونژوگه آنزیم-T4 طی فرآیند شستشو از آنزیم –T4 های کونژوگه و باند نشده جدا می شوند. با اضافه کردن سوبسترای مناسب آنزیم و واکنش آنزیم با آن رنگ تولید شده که متناسب با میزان فعالیت آنزیم موجود در سطح چاهک است. از چندین سرم مرجع با غلظت معلوم تیروکسین برای ترسیم گراف فعالیت و غلظت تیروکسین استفاده می شود. از طریق مقایسه منحنی دوز- پاسخ با فعالیت نمونه مجهول غلظت این نمونه تعیین می ­شود.